chromatofocusing!

Live forum: /viewtopic.php?t=4739

Anonymous

03-06-2006 12:08:58

op p 74 bij veldhoven, staat als je meer elutiebuffer, dan wordt de kolom bovenaan zuurder.

Hoe is dit? Blijft die dan niet neutraal door die amfotere moleculen, of wordt dit opgeheven als je meer elutiebuffer toevoegd?

Thanke!

Herlinde

03-06-2006 14:31:49

Je start met een kolom met een heel hoge pH, als je er dan buffer bijvoegt met een lagere pH zal je kolom dan bovenaan zuurder worden doordat de meest zure elementen uit je buffer zullen binden op de kolom.
De pH verlaagt dan, en bepaalde prote´nen zullen loskomen en migreren tot ze weer een meer basische pH tegenkomen, waar ze dan terug zullen op kunnen binden.

Is het zo duidelijk? of moet ik nog een poging doen?

Anonymous

03-06-2006 14:38:43

eiglijk nog nie echt :? want er staat,

de elutie start met een buffer met een lagere pH,... De meest zure zullen dan binden aan aminogroepen en bovenaan inde kolom de pH verlagen ( wat ook logisch is omdat er amfotere stoffen in die elutie oplossing zit).
Dan schrijft hij iets lager:
Door steeds meer elutiebuffer toe te voegen, zal verderop in de kolom neutralisatie optreden en wordt de kolom bovenaan zuurder.
( Dus dan wordt het neutraliserend effect van de ampholyten bovenaan in de kolom dan opgeheven?)

Hiermee zit ik nog altijd in de knoop.

Herlinde

03-06-2006 15:11:47

Door de pH bovenaan te verlagen, zullen de prote´nen waarvan hun IEP hoger is dan de pH loskomen en migreren naar beneden. Daar is de pH dan hoger dan het IEP en kunnen ze terug binden.

Maar hierdoor zullen enkel de steeds zuurdere prote´nen kunnen binden: doordat de minder zure naar beneden migreren blijven de zuurdere over en verlaagd de pH, er word buffer bijgevoegd, maar enkel die prote´nen met een IEP dat nog lager is dan de verlaagde pH kunnen binden, waardoor bovenaan de kolom een nog lagere pH zal krijgen, waardoor enkel nog zuurdere prote´nen zullen kunnen binden...

Klinkt dit aannemelijk?

Herlinde

10-06-2006 11:39:07

Voila sie vlien :D

vlien

10-06-2006 12:10:24

ik zient, twas zo dat ik het dacht. maar eigenlijk zegt ie toch 2x hetzelfde dan als ie zegt de pH verlaagt doordat de zure componenten van de elutiebuffer gaan binden aan de matrix en als ie zegt dat de proteinen met een iep hoger dan de pH gaan loskomen en verder gaan migreren. want die zure componenten komen dan toch in plaats van die prote´nen?

en het uiteindelijk resultaat is toch dat de minst zure prote´nen (hoogste IEP) in het staal eerst zullen elueren en de meest zure (laagste IEP) laatst Ú?

krln

10-06-2006 12:35:48

inderdaad